ПОЗНАВАТЕЛЬНОЕ

Сила воли ведет к действию, а позитивные действия формируют позитивное отношение

Как определить диапазон голоса - ваш вокал

Игровые автоматы с быстрым выводом

Как цель узнает о ваших желаниях прежде, чем вы начнете действовать. Как компании прогнозируют привычки и манипулируют ими

Целительная привычка

Как самому избавиться от обидчивости

Противоречивые взгляды на качества, присущие мужчинам

Тренинг уверенности в себе

Вкуснейший "Салат из свеклы с чесноком"

Натюрморт и его изобразительные возможности

Применение, как принимать мумие? Мумие для волос, лица, при переломах, при кровотечении и т.д.

Как научиться брать на себя ответственность

Зачем нужны границы в отношениях с детьми?

Световозвращающие элементы на детской одежде

Как победить свой возраст? Восемь уникальных способов, которые помогут достичь долголетия

Как слышать голос Бога

Классификация ожирения по ИМТ (ВОЗ)

Глава 3. Завет мужчины с женщиной

Оси и плоскости тела человека - Тело человека состоит из определенных топографических частей и участков, в которых расположены органы, мышцы, сосуды, нервы и т.д.

Отёска стен и прирубка косяков - Когда на доме не достаёт окон и дверей, красивое высокое крыльцо ещё только в воображении, приходится подниматься с улицы в дом по трапу.

Дифференциальные уравнения второго порядка (модель рынка с прогнозируемыми ценами) - В простых моделях рынка спрос и предложение обычно полагают зависящими только от текущей цены на товар.

Анализ уравнения Михаэлиса-Ментена

1. Если концентрация субстрата в реакции низкая, т. е. [S] << К_s, то уравнение имеет вид

V_{биохим.р.} = V_max [S] I К_S

При низких концентрациях субстрата скорость биохимической реакции прямо пропорциональна [S] и описывается уравнением пер­вого порядка.

2. При высоких концентрациях субстрата, т. е. если [S] >> К_s, величиной К можно пренебречь, тогда

V_{биохим.р.} = V_max [S] / [S].

где V_{биохим.р.} = V_max – уравнение нулевого порядка.

Уравнение Михаэлиса-Ментена было преобразовано Лайнуивером и Берком по методу двойных обратных величин: если имеется ра­венство между двумя величинами, то и обратные величины тоже равны:

1/V = (1/V) / (K_S + [S]) / [S] – уравнение Михаэлиса - Ментена.

– уравнение Лайнуивера - Берка.

Уравнение Михаэлиса-Ментена, где К_S = К_-1/K₊₁, носит ограни­ченный характер, так как учитывает только первый период процесса

K₊₁

Е + S ↔ ЕS

K_-1

и не учитывает второй

K₊₂

ЕS ↔ Е+ Р.

K_-2

Оно справедливо лишь для коротких сроков действия ферментов, когда наблюдается избыток субстрата и малый выход продукта реакции.

K₊₁ K₊₂

Д. Холдейн и Д. Бриггс для механизма Е + S ↔ ЕS ↔ Е + Р

K_-1 K_-2

вывели улучшенное уравнение Михаэлиса- Ментена:

,

где Кm = К_-1 + К₊₂ / К₊₁ – константа Михаэлиса.

Константа Михаэлиса Кm является важной характеристикой фер­мента, которая определяет его сродство к субстрату:

Кm = Кs + К₊₂ / К₊₁,

Так как Кs = К_-1 / К₊₁, то Кm > Кs, на величину К₊₂ / К₊₁. Константу Михаэлиса выражают в молях на литр (моль/л).

Физический смысл константы Михаэлиса

Если V = 1/2V, то Кm = [S]. Константа Михаэлиса равна концен­трации субстрата (S), при которой наблюдается скорость реакции, равная 1/2 максимальной скорости (моль/л).

5.4. Методы графического определения константы Михаэлиса

Графическое изображение константы Михаэлиса выглядит сле­дующим образом:

На графике по оси абсцисс откладывают концентрацию субстрата, по оси ординат – скорость реакции V, причем V – максимальная скорость, а V/2 – половина максимальной скорости. Отрезок на оси абсцисс – Кm.

Кроме того, используется графический способ определения констан­ты Михаэлиса по методу двойных обратных величин Лайнуивера и Берка.

Уравнение Лайнуивера – Берка имеет вид:

1/V = (Km /V) (1/S) (1/V)

Это уравнение изображено на графике прямой линией у = ах + b. По оси абсцисс откладывают 1/[S], по оси ординат – 1/V. Наклон полученной прямой равен Кm/V, отрезок, отсекаемый прямой от оси ординат – 1/V.Если полученную прямую продолжить за ось орди­нат, то она отсечет от оси абсцисс отрезок, равный обратной величине константы Михаэлиса – 1/Кm.

Определить значение константы Михаэлиса можно также по графику Иди-Хофсти:

Количественная характеристика активности фермента

В настоящее время используют две единицы ферментативной ак­тивности: стандартная единица U (или единица активности) и катал.

Единица активности U фермента – это такое его количество, которое при определенных условиях катализирует превращение 1 мкмоль субстрата в 1 мин, или, если атаке подвергается более чем одна связь в молекуле субстрата, 1 мк-экв (группы) в 1 мин.

Катал (кат) – это каталитическая активность фермента, которая увеличивает скорость реакции на 1 моль/с в определенной тест-системе.

В обоих случаях строго оговариваются условия, т. е. температура, рН, концентрация субстрата.

Удельную активность фермента определяют путем деления числа единиц ферментативной активности на массу белка или ткани (в г или мг).

Молярную активность фермента определяют путем деления чис­ла единиц ферментативной активности в образце на массу фермента, выраженную в микромолях (для очищенных ферментов):

;