 ПОЗНАВАТЕЛЬНОЕ Сила воли ведет к действию, а позитивные действия формируют позитивное отношение Как определить диапазон голоса - ваш вокал Игровые автоматы с быстрым выводом Как самому избавиться от обидчивости Противоречивые взгляды на качества, присущие мужчинам Вкуснейший "Салат из свеклы с чесноком" Натюрморт и его изобразительные возможности Применение, как принимать мумие? Мумие для волос, лица, при переломах, при кровотечении и т.д. Как научиться брать на себя ответственность Зачем нужны границы в отношениях с детьми? Световозвращающие элементы на детской одежде Как победить свой возраст? Восемь уникальных способов, которые помогут достичь долголетия Классификация ожирения по ИМТ (ВОЗ) Глава 3. Завет мужчины с женщиной
Оси и плоскости тела человека - Тело человека состоит из определенных топографических частей и участков, в которых расположены органы, мышцы, сосуды, нервы и т.д.
| Металлохелатная аффинная хроматография
Металлохелатная аффинная хроматография является наиболее распространенным методом очистки рекомбинантных белков. Один из приемов металлохелатной аффинной хроматографии основан на том, что некоторые аминокислоты, в частности, гистидин, способны формировать комплексы с ионами металлов. После иммобилизации на хроматографической фазе хелатирующих групп, целевой рекомбинантный белок, содержащий блок из нескольких остатков гистидина связывается с хроматографической фазой, после чего сопутствующие белки отделяются, и проводится элюция целевого белка. Кроме блока из остатков гистидина, целевой рекомбинантный белок может содержать последовательности глутатион-S-трансферазы, S-белка и других, при этом принципы хроматографического выделения целевого рекомбинантного белка остаются теми же. Недостатком метода является то, что создание соответствующего сорбента для этого вида хроматографии требует значительных усилий и сопряжено с серьезными методическими трудностями. В процессе эксплуатации сорбента происходит "вымывание" ионов металла из активных центров носителя, что сопровождается ухудшением его сорбционных характеристик.
Высокоэффективная жидкостная хроматография Отличительной особенностью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) является наличие в аппаратуре специальных насосов, позволяющих с высокой скоростью продавливать жидкую фазу через колонку, имеющую диаметр частиц от 3 до 15 мкм, а также наличие высокочувствительных детекторов для обнаружения разделенных веществ. Хроматографы для ВЭЖХ включают несколько блоков: дегазатор (для удаления растворенного кислорода из растворителей), насос, термостат, детектор (УФ, рефрактометр и др.) (рис. 1.2.7). На хроматограф могут быть установлены различные колонки: ионообменные, гельфильтрационные, гидрофобные и др. При разделении высоколабильных белков высокое давление нежелательно, поэтому применяют хроматографию при среднем давлении.
Рис. 1.2.7. Схема высокоэффективного жидкостного хроматографа. 1 – резервуар для элюента, 2 – насос, 3 – инжектор для ввода пробы, 4 – колонки для ВЭЖХ, 5 – термостат, 6 – детектор с проточной кюветой, 7 – регистрирующая система, 8 – персональный компьютер. Электрофорез Электрофорез считается очень эффективным способом разделения белков. Принцип разделения белков методом электрофореза заключается в том, что молекула белка в растворе при любом рН, отличающемся от ее изоэлектрической точки, имеет заряд. Это приводит к тому, что белок движется в электрическом поле. Движущая сила определяется величиной напряженности электрического поля Е умноженной на суммарный заряд частицы z. Этой силе противостоят силы вязкости среды, пропорциональные коэффициенту вязкости η, радиусу частицы r (стоксовскому радиусу) и скорости v.
E∙z = 6πηrv Удельная подвижность:
u = z / 6πηrv Таким образом, молекулы приобретают разные скорости в зависимости от величины заряда и размеров. После отключения тока гель помещают в специальный раствор, где интересующие исследователя белки окрашиваются. Существует электрофорез в растворе, но он имеет ограниченное применение, т.к. исследуемые белки часто подвергаются значительному диффузионному размыванию. Однако сейчас стало возможным применять этот метод в условиях невесомости в космосе, что устраняет конвекционные токи, обуславливающие диффузионную размывку.
|
