 ПОЗНАВАТЕЛЬНОЕ Сила воли ведет к действию, а позитивные действия формируют позитивное отношение Как определить диапазон голоса - ваш вокал Игровые автоматы с быстрым выводом Как самому избавиться от обидчивости Противоречивые взгляды на качества, присущие мужчинам Вкуснейший "Салат из свеклы с чесноком" Натюрморт и его изобразительные возможности Применение, как принимать мумие? Мумие для волос, лица, при переломах, при кровотечении и т.д. Как научиться брать на себя ответственность Зачем нужны границы в отношениях с детьми? Световозвращающие элементы на детской одежде Как победить свой возраст? Восемь уникальных способов, которые помогут достичь долголетия Классификация ожирения по ИМТ (ВОЗ) Глава 3. Завет мужчины с женщиной
Оси и плоскости тела человека - Тело человека состоит из определенных топографических частей и участков, в которых расположены органы, мышцы, сосуды, нервы и т.д.
| Реакция связывания комплемента (РСК)
ЗАНЯТИЕ 1.3.5 СИСТЕМА АНТИГЕН-АНТИТЕЛО В ДИАГНОСТИКЕ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ (ПРОДОЛЖЕНИЕ) Цель:изучить механизмы взаимодействия АГ-АТ, принципы и методы постановки РСК, РИФ, ИФА.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:
· интерпретировать результаты серологических исследований.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ: методами постановки и оценки результатов серологических реакций
Работа № 1. Реакция связывания комплемента (РСК) Цель: разобрать механизм, освоить различные методы постановки РСК в зависимости от цели исследования, интерпретировать результаты реакций. Самостоятельная работа. Учесть результат РСК, поставленной с целью идентификации возбудителя. Направление: Ингредиенты: I. Опытная система: 1) 2) 3) 4) Через 30 минут: I.I Индикаторная система: 1) 2) Механизм:
Постановка:
Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Самостоятельная работа. Оценить результат РСК, с целью выявления комплементсвязывающих АТ в парных сыворотках больного. Направление: Ингредиенты: I. Опытная система: 1) 2) 3) 4) Через 30 минут: II. Индикаторная система: 1) 2)
Механизм (см. схему выше):
Постановка: I неделя
II неделя
1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 КС КД КГС
Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Работа № 2. Реакция иммунной флюоресценции (РИФ)
Цель:разобрать механизм, освоить различные методы постановки РИФ в зависимости от цели исследования, интерпретировать результаты реакций. Самостоятельная работа. Прямой метод постановки РИФ. Разобрать реакцию в соответствии с предложенной схемой.
Направление: Ингредиенты: 1)
2)
3) Механизм:
Постановка:
Результат:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Вывод:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Самостоятельная работа. Непрямой метод постановки РИФ. Разобрать реакцию в соответствии с предложенной схемой. Направление: Ингредиенты:
1)
2)
3)
4) Механизм:
Постановка:
Результат:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________ Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Работа № 3. Иммуноферментный анализ (ИФА)
Цель: разобрать механизм, освоить различные методы постановки ИФА в зависимости от цели исследования, интерпретировать результаты реакций. Самостоятельная работа. Прямой метод постановки ИФА. Разобрать реакцию в соответствии с предложенной схемой.
Направление: Ингредиенты: 1) 2) 3) 4) 5) Механизм:
Постановка:
«О» «КН» «КП» Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Самостоятельная работа. Непрямой метод постановки ИФА. Разобрать реакцию в соответствии с предложенной схемой.
Направление: Ингредиенты: 1) 2) 3) 4) 5) Механизм:
Постановка: I неделя
II неделя
1/14 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 «КН» «КП» Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Подпись преподавателя ________________________________________________________ Самостоятельная работа во внеурочное время: Решить задачи: I. В клинику поступил пациент с предполагаемым диагнозом «Хроническая гонорея». Для подтверждения диагноза проведено серологическое исследование путем постановки РСК. Титр первой недели 1/128, второй – 1/128. Изучите механизм РСК, запишите ингредиенты. Сделайте вывод о предполагаемом диагнозе. Ингредиенты для постановки РСК: 1.___________________________________________________________________________ 2.___________________________________________________________________________ 3.___________________________________________________________________________ 4.___________________________________________________________________________ 5.___________________________________________________________________________ 6.___________________________________________________________________________ Результатом первой фазы РСК является_____________________________________________________________________ Результатом второй фазы РСК является_____________________________________________________________________ Феномен реакции _____________________________________________________________ Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________
II. У пациента с подозрением на сибирскую язву взято на исследование отделяемое карбункула. Проведена прямая РИФ. При люминесцентной микроскопии наблюдается свечение.Изучите механизм прРИФ, запишите ингредиенты. Сделайте вывод о предполагаемом диагнозе. Ингредиенты для постановки прямой РИФ: 1.___________________________________________________________________________ 2.___________________________________________________________________________ 3.___________________________________________________________________________ Иммунные сыворотки в РИФ обрабатываются______________________________________________________________ Феномен реакции_____________________________________________________________ Вывод_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________
III. В анонимный кабинет обратился гражданин Я. С просьбой проверить его на инфицирование ВИЧ. Проведено серологическое исследование с применением ИФА. Обнаружены антигены вируса gp 120 и gp41.. Изучите механизм ИФА, запишите ингредиенты. Сделайте вывод о предполагаемом диагнозе. Иммуноферментный анализ основан на: ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Ингредиенты для постановки ИФА: 1.___________________________________________________________________________ 2.___________________________________________________________________________ 3.___________________________________________________________________________ 4.___________________________________________________________________________ Феномен реакции_____________________________________________________________ Вывод:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Подпись преподавателя ________________________________________________________ Теоретическая справка Реакции иммунного лизиса
Антитела могут вызывать лизис, т.е. растворение клеток, только при участии комплемента (С). Следовательно, все реакции с участием С называются реакциями иммунного лизиса. К ним относят: РСК, р. гемолиза, р. бактериолиза. Для реакции необходимы: 1. Антиген - микробы, эритроциты и другие клетки. 2. Антитела (лизины) - иммунная сыворотка, реже сыворотка больного. Бактериологическая сыворотка содержит антитела, лизирующие бактерии, гемолитическая - гемолизины, способствующие лизису эритроцитов, лизис спирохет вызывают спирохетолизины, клеток - цитолизины и т. д. Титр гемолитической сыворотки - ее наибольшее разведение, при котором происходит полный гемолиз 3% взвеси эритроцитов барана в присутствии комплемента 1:10. 3. Комплемент - неспецифический белок, содержащийся в сыворотке человека и теплокровных животных. Больше всего комплемента в сыворотке морских свинок. Эту сыворотку (смесь от нескольких животных) обычно используют в качестве комплемента. Свежий (нативный) комплемент нестоек и легко разрушается при нагревании, встряхивании, хранении, поэтому пользоваться им можно не позже 1-2-го дня после получения. Консервированный комплемент (на 10 мл сыворотки 0,2 г борной кислоты и 0,3 г сульфата натрия) сохраняется при 4°С до 2 недель. Чаще применяют сухой комплемент. Перед употреблением его растворяют изотоническим раствором хлорида натрия до первоначального объема, указанного на этикетке. 4. Изотонический раствор хлорида натрия. К работе № 1 Реакция связывания комплемента (РСК) Реакция связывания комплемента протекает в 2 фазы. В первой (специфической) взаимодействуют антиген, антитело и комплемент. Если антиген соответствует антителу, они соединяются и образуют комплекс, который связывает комплемент. Образовавшееся соединение внешне не проявляется. Об его образовании узнают с помощью индикатора, которым является гемолитическая система, участвующая во второй (индикаторной) фазе реакции. Гемолитическая система состоит из эритроцитов барана и соответствующей гемолитической сыворотки. Гемолитическая сыворотка, реагируя с эритроцитами, делает их чувствительными (сенсибилизирует) к действию комплемента, в присутствии которого эритроциты разрушаются (лизируются). Если лизиса нет, комплемент связан первой системой и, следовательно, антиген в ней соответствует антителу. Отсутствие гемолиза регистрируют как положительный ответ. Если в испытуемой системе антиген не соответствует антителу, иммунный комплекс не образуется и комплемент остается свободным. Свободный комплемент участвует во второй системе, вызывая гемолиз эритроцитов, результат РСК при этом отрицательный. Для постановки РСК требуется точное определение количественных соотношений всех ингредиентов, участвующих в реакции: исследуемой сыворотки, антигена, комплемента, гемолитической сыворотки кролика и эритроцитов барана. Поэтому, постановке основного опыта предшествует титрование гемолитической сыворотки и выбор ее рабочего разведения, титрование других ингредиентов. В РСК используют: 1. Прогретую (инактивированную) сыворотку при 56°С в течение 30 мин, чтобы разрушить имеющийся в ней комплемент. Обычно сыворотку больного применяют в разведении 1:5-1:10, иммунные (диагностические) сыворотки – в разведении 1:50 и более. 2. Диагностикум. 3. Комплемент в рабочей дозе. Перед опытом С обычно титруют, т. е. определяют наименьшее его количество, при добавлении которого к гемолитической системе происходит полный гемолиз в течение 1 ч при 37°С. Титруют С по схеме. 4. Эритроциты барана. Используют 3% взвесь отмытых эритроцитов барана. 5. Гемолитическая сыворотка. В РСК применяют гемолитическую сыворотку в тройном титре. Например, если титр гемолитической сыворотки составляет 1/200, то рабочее разведение сыворотки составляет 1/400, следовательно, к 0,1 мл гемолитической сыворотки следует добавить 39,9 мл изотонического раствора хлорида натрия.
К работе № 2 |
