ПОЗНАВАТЕЛЬНОЕ

Оси и плоскости тела человека - Тело человека состоит из определенных топографических частей и участков, в которых расположены органы, мышцы, сосуды, нервы и т.д.

Отёска стен и прирубка косяков - Когда на доме не достаёт окон и дверей, красивое высокое крыльцо ещё только в воображении, приходится подниматься с улицы в дом по трапу.

Дифференциальные уравнения второго порядка (модель рынка с прогнозируемыми ценами) - В простых моделях рынка спрос и предложение обычно полагают зависящими только от текущей цены на товар.

Работа № 3. Реакция преципитации (РП)

ЗАНЯТИЕ 1.3.4

СИСТЕМА АНТИГЕН-АНТИТЕЛО В ДИАГНОСТИКЕ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ

Цель:изучить механизмы взаимодействия АГ-АТ, принципы и методы постановки: РА, РПГА, РП.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. РА. Компоненты, механизм, способы постановки, применение.

2. РПГА. Компоненты, механизм, способы постановки, применение.

3. РП. Компоненты, механизм, способы постановки, применение.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

использовать реакции иммунитета в диагностике инфекционных болезней.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ:

методами постановки и оценки результатов серологических реакций

Теоретические аспекты:

Серология - раздел иммунологии, изучающий взаимодействие Аг и Ат в реакциях in vitro.

Серологические методы - совокупность реакций in vitro, основанных на Аг-Ат взаимодействии и направленных на выявление в сыворотке крови и других жидкостях организма Ат, а также Аг в исследуемом материале.

Сероиндикация - обнаружение возбудителя в исследуемом материале (определение рода возбудителя) с поливалентными сыворотками.

Сероидентификация - определение вида возбудителя или отдельных антигенов с монорецепторными сыворотками.

Серодиагностика - обнаружение антител или определение титра антител в сыворотке крови

Схема описания реакции:

Направление (цель)

Ингредиенты (компоненты)

Механизм (схема)

Способ постановки реакции

Результат

Работа № 1. Реакция агглютинации (РА)

Цель: Разобрать механизм, освоить различные методы постановки РА в зависимости от цели исследования, интерпретировать результаты реакций.

1. Самостоятельная работа. Определить родовую принадлежность выделенной чистой культуры в ориентировочной РА на стекле с поливалентными сыворотками: сальмонеллезной ABCDE, шигеллезной, иерсиниозной (сероиндикация). Поставить, учесть, оценить результат РА (см. теоретическую справку).

Направление:

Ингредиенты:

Механизм:

Постановка:

Результат:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. Самостоятельная работа. Определить вид исследуемой культуры в развернутой РА на стекле с моновалентными сыворотками (сероидентификация). Поставить, учесть, оценить результат РА.

Направление:

Ингредиенты:

Механизм (схема см. выше)

Постановка:

3. Самостоятельная работа. Учесть результат РА с дизентерийным диагностикумом с целью выявления антител в парных сыворотках пациента (серодиагностика). Парные сыворотки - это сыворотки от одного и того же больного, взятые в начале болезни и через одну две недели с целью выявления нарастания титра антител. Сделать вывод.

Направление:

Ингредиенты:

Механизм (см. выше)

Постановка:

1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 КС КД

Работа № 2. Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА и РПГА синонимы)

Цель: разобрать механизм, освоить метод постановки РПГА в зависимости от цели исследования, интерпретировать результаты реакций.

Самостоятельная работа. Учесть результат РПГА с эритроцитарным сальмонеллезным диагностикумом для определения специфических АТ в парных сыворотках больного.

Направление:

Ингредиенты:

Механизм:

Постановка:

Работа № 3. Реакция преципитации (РП)

Цель:разобрать механизм, освоить метод постановки РП в зависимости от цели исследования, интерпретировать результаты реакций.

Самостоятельная работа. Поставить РП для выявления сибиреязвенного Аг в экстракте из шерсти животного. Оценить результат, сделать вывод.

Направление:

Ингредиенты:

Механизм:

Постановка:

«К» «О»

Самостоятельная работа. Разобрать принцип постановки РП в геле. Сделать вывод.

Направление:

Ингредиенты:

Механизм (см. выше)

Постановка:

Подпись преподавателя ________________________________________________________

Самостоятельная работа студента во внеурочное время:

Ответить на вопросы

1) Агглютинация-это__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Ингредиенты для постановки РА:

1.___________________________________________________________________________

2.___________________________________________________________________________

3.___________________________________________________________________________

Феномен реакции _____________________________________________________________

2) Ингредиенты для постановки РПГА:

1.___________________________________________________________________________

2.___________________________________________________________________________

3.___________________________________________________________________________

Феномен реакции_____________________________________________________________

3) Реакцию преципитации ставят в том случае, если____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Ингредиенты для постановки РП:

1.___________________________________________________________________________

2.___________________________________________________________________________

3.___________________________________________________________________________

Феномен реакции____________________________________________________________

4) Что изображено на схеме?

Какой материал можно исследовать?

Описать суть метода.

Применение в медицине.

5) Что изображено на схеме?

Какой материал можно исследовать?

Какой метод исследования?

Описать суть метода.

Применение в медицине.

6) Что изображено на схеме?

Какой материал можно исследовать?

Какой метод исследования?

Описать суть метода.

Применение в медицине.

7) Что изображено на схеме?

Какой материал можно исследовать?

Какой метод исследования?

Описать суть метода.

Применение в медицине.

Подпись преподавателя_________________________________________________________

Теоретическая справка

К работе № 1

Реакция агглютинации (РА)

Агглютинация - это склеивание и выпадение в осадок микробов или других клеток под действием антител в присутствии электролита (изотонического раствора хлорида натрия). Группы склеенных бактерий (клеток) называют агглютинатом. Для реакции агглютинации необходимы следующие компоненты:

1. Антитела (агглютинины), которые находятся в сыворотке больного или иммунного животного.

2. Антиген - взвесь живых или убитых микробов, эритроцитов или других клеток.

3. Изотонический (0,9%) раствор хлорида натрия.

Реакцию агглютинации для серодиагностики применяют при брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля), при бруцеллезе (реакция Райта и Хеддлсона), туляремии и т.д. Антителом при этом является сыворотка больного, а антигеном известный микроб. При идентификации микробов или других клеток антигеном служит их взвесь, а антителом - известная иммунная сыворотка. Эту реакцию широко применяют для диагностики кишечных инфекций, коклюша и др.

Методы постановки РА

Ориентировочная РА на стекле

Развернутая РА

(объемный метод)

Реакция коагглютинации

Развернутая РА на стекле (сероидентификация)

Реакция агглютинации на стекле. На обезжиренное предметное стекло наносят две капли специфической (адсорбированной) сыворотки и каплю изотонического раствора хлорида натрия. Неадсорбированные сыворотки предварительно разводят в соотношении 1:5 - 1:100. Капли на стекло необходимо наносить так, чтобы между ними было расстояние. Культуру петлёй или пипеткой тщательно растирают на стекле, а потом вносят в каплю изотонического, раствора хлорида натрия и в одну из капель сыворотки, размешивая в каждой до образования гомогенной взвеси. Капля сыворотки, в которую не внесена культура, является контролем сыворотки.

Внимание! Нельзя переносить культуру из сыворотки в каплю изотонического раствора хлорида натрия, которая является контролем антигена. Реакция протекает при комнатной температуре в течение 1-3 мин. Если контроль сыворотки остаётся прозрачным, в контроле антигена наблюдается равномерная муть, а в капле, где культура смешана с сывороткой, появляются хлопья агглютината на фоне прозрачной жидкости, результат реакции считается положительным.

Диагностическая Физиологический

сыворотка +культура раствор + культура

Развёрнутая реакция агглютинации (объемный метод). Готовят последовательные, чаще всего двукратные, разведения сыворотки. Метод называют объёмным. Для определения титра антител в сыворотке крови возьмите 6 пробирок. В первую пробирку налейте 1 мл исходного разведения сыворотки 1:50 и во все 6 пробирок градуированной пипеткой внесите по 1 мл физиологического раствора. В первой пробирке получится разведение сыворотки 1:100 при объёме 2 мл. Из первой пробирки 1 мл перенесите во вторую пробирку, где разведение станет 1:200. Так сделайте ряд последовательных разведений сыворотки в 5 первых пробирках (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600). Из пятой пробирки 1 мл вылейте в дезинфицирующий раствор. Во все 6 пробирок добавьте по 2 капли диагностикума. Шестая пробирка является контролем культуры, так как содержит только физиологический раствор и диагностикум.

Ингредиенты	номер пробирки
						контроль сыворотки	контроль диагности-кума
Физиологический	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0
раствор
Сыворотка больного в	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	-
разведении 1:50
Диагностикум (капли)						-
Разведение сыворотки	1:100	1:200	1:400	1:800	1:1600	1:100	-

Такой контроль необходим для исключения спонтанной агглютинации культуры. Пробирки встряхивают и помещают в термостат при температуре 37°С на 2 часа, а затем оставляют на сутки при комнатной температуре, после чего производят учёт результатов реакции агглютинации. При постановке реакции агглютинации с сыворотками детей первых месяцев жизни в связи с функциональной неполноценностью антителообразования необходимо выявление более низких титров антител, что учитывается при разведении сыворотки. Исходное разведение сыворотки берут 1:25. В первой пробирке получают разведение 1:50, затем 1:100 и т.д.

При положительном результате реакции в пробирках видны склеевшиеся клетки в виде зерен или хлопьев на фоне прозрачной жидкости. Агглютинат постепенно оседает на дно в виде «зонтика», а жидкость над осадком просветляется. Контроль антигена равномерно мутный.

По характеру осадка различают мелко- и крупнозернистую (хлопьевидную) агглютинацию. Мелкозернистая агглютинация получается при работе с О-сыворотками. Крупнозернистая - при взаимодействии подвижных микробов со жгутиковыми Н-сыворотками. Она наступает быстрее мелкозернистой, образующийся при этом осадок очень рыхлый и легко разбивается.

Интенсивность реакции выражается следующим образом:

++++ все клетки осели, жидкость в пробирке совершенно прозрачна. Результат реакции резко положительный;

+++ осадок меньше, нет полного просветления жидкости. Результат реакции положительный;

++ осадок еще меньше, жидкость мутнее. Результат реакции сомнительный;

на дне пробирки незначительный осадок, жидкость мутная. Сомнительный результат реакции;

- осадка нет, жидкость равномерно мутная, как в контроле антигена. Отрицательный результат реакции

К работе № 2